關(guān)于英克司蘭

小核酸藥物是繼小分子化學(xué)藥和抗體蛋白藥物之后的新一代革命性治療藥物。小核酸藥物是一類通過化學(xué)合成方法制備的具有特定序列和功能的短鏈核酸藥物，通常由十幾個至幾十個或更長的核苷酸構(gòu)成，它們不是直接靶向蛋白質(zhì)，而是靶向與疾病相關(guān)的mRNA或非編碼RNA，通過干預(yù)遺傳信息從DNA到蛋白質(zhì)的傳遞過程來發(fā)揮作用。

英克司蘭（Inclisiran）作為siRNA類藥物的典型代表，是一種創(chuàng)新型降脂藥物，是全球首款獲批用于降脂治療的siRNA藥物。siRNA是一種人工合成的短雙鏈RNA分子，通過靶向特定基因的mRNA實現(xiàn)基因沉默。與傳統(tǒng)小分子或抗體藥物不同，siRNA在基因轉(zhuǎn)錄后水平直接干預(yù)蛋白合成，屬于核酸類藥物范疇。英克司蘭的核心機制是通過RNA干擾（RNAi）技術(shù)抑制肝臟中PCSK9蛋白的合成，進而降低低密度脂蛋白膽固醇。

圖1：英克司蘭鈉注射液

英克司蘭由兩條寡核苷酸鏈組成，正義鏈（Sense strand）包含21個核苷酸，末端連接GalNAc配體，用于肝細胞靶向。反義鏈（Antisense strand）與正義鏈互補，通過RNA干擾機制特異性結(jié)合并降解PCSK9 mRNA。本文案例采用Bio Oligo100實驗室級核酸合成儀設(shè)備，在工藝優(yōu)化后合成的樣品經(jīng)HPLC檢測，正義鏈粗品純度達86.2%，反義鏈粗品純度達84.4%，單體平均偶聯(lián)效率可達到99%，合成效果優(yōu)異。

英克司蘭合成工藝

Bio Oligo 100是一款實驗室級別的核酸合成儀，合成規(guī)模覆蓋50μmol至9 mmol。該設(shè)備采用？榛峁購橢悄芑砑系統(tǒng)，配合不同規(guī)格的合成柱，能夠高效合成特定量的 DNA 和 RNA。系統(tǒng)配備高精度柱塞泵并結(jié)合流過式固相合成技術(shù)，可顯著降低試劑消耗量，支持線性放大。

圖2：Bio Oligo 100實驗室核酸合成儀

表1：Bio Oligo 100系統(tǒng)合成英克司蘭工藝參數(shù)表

（*6.3毫升合成柱工藝簡介，具體參數(shù)編于軟件工作站）

合成過程監(jiān)控：

合成系統(tǒng)利用UV紫外檢測器實時監(jiān)測脫保護階段DMT基團的吸收值，在經(jīng)過脫保護清洗階段后，通過UV不再起峰或有峰值來判定是否清洗干凈。經(jīng)過多次實驗觀察對比，優(yōu)化后的方法能夠精準控制脫保護的時間和用量，避免因脫保護時間過長或酸濃度過高而產(chǎn)生的脫嘌呤雜質(zhì)。

通過監(jiān)測耦合階段電導(dǎo)值的波動來判斷單體耦合效果情況。如若電導(dǎo)值過低，可能是單體進樣量不足導(dǎo)致或者是管路密封性存在問題等情況。

通過氧化/硫代階段的電導(dǎo)峰值和峰形的變化來判斷該單體的合成是否順利。此外，通過電導(dǎo)值是否下降到0.05mS/cm以下來判斷氧化劑是否清洗干凈，避免過量殘留而導(dǎo)致的過度氧化。

硬件/軟件配置：

使用高精度柱塞泵，嚴格控制各階段的試劑使用量，進一步優(yōu)化反應(yīng)過程中單體的當量。在降低原料成本的同時，從源頭規(guī)避序列截短（N-1）或延伸（N+1）的缺陷，保障了全長鏈的完整性以及準確性。

合成過程中，在軟件的控制下，閥門精準且快速切換，確：銑傻淖既沸。軟件性能便捷，可實現(xiàn)中英文切換，合成過程中，可隨時修改未運行階段的工藝參數(shù)并繼續(xù)運行，便于合成過程中觀察每個單體步驟的運行情況從而實時優(yōu)化工藝參數(shù)。

圖3：正義鏈合成全過程中UV350nm及電導(dǎo)監(jiān)控圖譜

表2：正義鏈合成過程中的合成效率實時監(jiān)控

圖4：正義鏈液相檢測圖

圖5：正義鏈質(zhì)譜檢測圖

圖6：反義鏈合成全過程中UV350nm及電導(dǎo)監(jiān)控圖譜

表3：反義鏈合成過程中的合成效率實時監(jiān)控

圖7：反義鏈液相檢測圖

圖8：反義鏈質(zhì)譜檢測圖

英克司蘭合成粗品結(jié)果

經(jīng)高效液相色譜（HPLC）分析，英克司蘭正義鏈合成粗品純度86.2%，反義鏈合成粗品純度為84.4%，單體平均偶聯(lián)效率可達99%，質(zhì)譜檢測分子量正確。該數(shù)據(jù)表明，在未經(jīng)過任何純化的前提下，合成產(chǎn)物中的目標全長序列占比很高，主峰鮮明，雜質(zhì)（N+N-）控制良好，為后續(xù)的純化工藝奠定了堅實基。ぜ瓶苫竦媒細叩寐實拇炕蟛。

質(zhì)譜檢測（MS）結(jié)果顯示，合成產(chǎn)物的分子量與英克司蘭正義鏈及反義鏈的理論分子量完全一致，準確無誤。這從最根本的層面上確認了銀河集團成功合成了預(yù)期設(shè)計的核酸序列，所有化學(xué)修飾均已正確引入，未發(fā)生非預(yù)期修飾或降解。

上述案例通過使用Bio Oligo 100實驗室核酸合成儀完成，驗證了該設(shè)備在寡核苷酸合成中高效、快速與可靠的表現(xiàn)。合成所得粗品純度優(yōu)異，體現(xiàn)出Bio Oligo 100系統(tǒng)出色的合成效率、運行穩(wěn)定性以及新版本軟件在方法優(yōu)化方面的便捷性。該合成儀軟件支持中英文界面，可定制化編寫流程，用戶自主性強，能夠根據(jù)合成工藝自動計算試劑的理論用量與實時消耗量，有助于合成前的充分準備。銀河集團科技的Bio Oligo 100核酸合成儀還可滿足用戶的個性化定制需求，適用于不同規(guī)模與類型的寡核苷酸合成應(yīng)用。

銀河集團科技小核酸藥物整體解決方案

銀河集團科技為客戶提供涵蓋核酸合成系統(tǒng)、層析系統(tǒng)、制備液相系統(tǒng)及切向流過濾系統(tǒng)在內(nèi)的完整產(chǎn)品組合，全面支持從基礎(chǔ)研究、工藝開發(fā)到規(guī)模化生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)。公司產(chǎn)品線可滿足從實驗室級別探索、中試工藝放大到工業(yè)級生產(chǎn)的全方位需求，憑借穩(wěn)定可靠的系統(tǒng)性能和靈活可擴展的配置方案，為小核酸藥物從早期研發(fā)到商業(yè)化生產(chǎn)全流程提供堅實的技術(shù)支撐與解決方案。

圖9 小核酸藥物生產(chǎn)整體化解決方案